荧光RT-PCR检测试剂盒结果的判断，最直观的判断是看放大曲线是否正常。 很多老师都受到异常放大曲线的困扰，我们结合几个实例来看一下常见的异常放大曲线的分析，那么下面一起了解下猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒检测相关知识吧!

　　1. 荧光RT-PCR正常放大曲线

　　随着实验的进行，扩增产物不断积累，荧光信号也相应增加。 每1个循环采集荧光信号，经过一定的循环数(例如40个循环)后，得到以下放大图。 横轴表示放大的循环数cycle，纵轴表示荧光的强度。

　　这还需要阐明以下基本概念。

　　基线：指在PCR放大反应的前几个循环中，荧光信号变化不大。 接近一直线，其直线称为基线。 明白这个就行了，对实验操作影响不大。

　　阈值线：一般以前15个周期的荧光信号为荧光背景信号，阈值的设定为3-15个周期的荧光信号标准偏差的10倍，是PCR放大的指数期(图中箭头所示)。

　　2 .标准曲线

　　制作标准曲线有什么用，标准曲线可以用来决定未知样本的初始量。 需要绝对定量时，需要标准曲线。

　　各模板的CT值和该模板最初拷贝数的对数呈线性关系，最初拷贝数越大，CT值越小。 标准品以一定倍数稀释至5-6个浓度左右，根据RT-PCR的反应条件进行反应。 以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以CT值为纵坐标，绘制直线曲线。 未知样本的拷贝数可以根据曲线方程计算。

　　3 .溶解曲线

　　简言之，就是考察染料标记法结果的特异性。 更简单地说，就是以分钟为单位确认引物是否有效。

　　我不解释复杂的原理。 关键看怎么看怎么判断。 如果反应产物单一，曲线上会出现尖峰; 如果有二聚体和非特异性扩增，至少会出现两个峰，或者进一步恶化。 采用SYBR Green染料必须绘制溶解曲线，但毕竟是非特异性染料。

　　在实验中，大家还是会遇到很多问题。 让我列举几个常见问题：

　　(1)放大曲线经过40个循环后没有平台期? 还是放大曲线不会指数上升? 在这种情况下，你的初始模板浓度太低了，很可能经过40个周期还没有达到平台期，可以通过增加周期数来验证是否是这个问题。

　　(2)熔化曲线的问题，例如，有多个峰，或者尖峰尖有小峰，或者没有峰? 因为这与引物及反应的体系温度有关，所以如果没有峰值，说是乱糟糟的很可能是引物的问题，所以建议重新设计引物。 在有小峰的情况下，可以通过优化退火温度的优化等反应条件来消除这种影响。

　　以上介绍的就是猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒检测相关知识，如需了解更多，可随时联系我们!